分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
分光光度計的光譜范圍
包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～400 nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.
　　鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜,光通過三棱鏡折射后,可得到由紅,橙,黃,綠,藍,靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源.
　　氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長的光譜,可作為紫外光光度計的光源.
　　物質(zhì)的吸收光譜（1）
　　如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜.
　　不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).
　　物質(zhì)的吸收光譜（2）
　　當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時,透過的光的強度減弱.因為有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收,只有一部分光可透過溶液.
　　入射光 = 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光
　　如果我們用蒸餾水（或組成此溶液的溶劑）作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失,則:
　　入射光 = 吸收光 十 透過光