酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得,也可用分光光度計(jì)相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的.下圖便是目前常用的酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)圖.光源燈發(fā)出的光經(jīng)聚光鏡,光欄后到達(dá)反射鏡,經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電管.
它和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異:
(l)盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的
聚乙烯材料制成,對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,故用它作為固相載體.
⑵由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液.
⑶酶標(biāo)儀通常不僅用A,有時(shí)也使用光密度OD來表示吸光度.
酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分.自動(dòng)型的儀器
有X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu),可將微孔板L的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測試,手動(dòng)型則靠手工移動(dòng)微孔板來進(jìn)行測量.
在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)儀,此類酶標(biāo)儀一般都是自動(dòng)化型的.它沒有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測器,如 12個(gè)通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個(gè)光源,12個(gè)檢測器和12個(gè)放大器,在X方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下,樣品12個(gè)為一排被檢測.多通道酶標(biāo)儀的檢測速度快,但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高.
酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的專用光電比色計(jì)或分光光度計(jì),其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔極中的待測標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大,對(duì)數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來移動(dòng)微孔板,從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測過程。而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測,因此省去了X,Y 酶標(biāo)儀方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡單。微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.其常見規(guī)格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對(duì)其可進(jìn)行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測。
3使用注意事項(xiàng)
酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器,因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,還能夠延長其使用壽命。根據(jù)DINVDE0871條例,儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據(jù)DIN45635-19條例:
儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
為延緩光學(xué)部件的老化,應(yīng)避免陽光直射。
操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間,環(huán)境濕度在15%-85%之間。
操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽,煙塵。
保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面,以及足夠的操作空間。
酶標(biāo)儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過目測判斷結(jié)果,操作過程隨意性較大,在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣,會(huì)造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng):
使用加液器加液,加液頭不能混用。
洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機(jī)洗板,避免交叉污染。
嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作,反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。
在測量過程中,請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板,以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。
請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請(qǐng)洗手。
如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害,請(qǐng)嚴(yán)格按照試
劑盒的操作說明,以防對(duì)操作人員造成損害。
如果儀器接觸過污染性或傳染性物品,請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒。
不要在測量過程中關(guān)閉電源。
對(duì)于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù),以達(dá)到最佳效果。
使用后蓋好防塵罩。 出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系,切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。
酶標(biāo)儀(MicroplateReader)是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度。
酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中,特別在近幾年中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用,使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛,同時(shí)促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。
目前國內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項(xiàng)目,如:乙肝五項(xiàng)、愛滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法,報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如:某弓形蟲檢測試劑盒中,臨界值規(guī)定為:陰性對(duì)照品的OD值×2.5,通過目測無法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行,但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。
國內(nèi)多家權(quán)威機(jī)構(gòu),如衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性,并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀,酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀,并提供酶標(biāo)儀測定的原始數(shù)據(jù),而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時(shí)酶免檢測的項(xiàng)目往往是一些實(shí)質(zhì)性的感染和病變(如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等),判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn),由誤診引起的糾紛很難處理。另外,住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、愛滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段,正逐漸被許多單位所采用。
主要用于血液學(xué)檢驗(yàn) 、基因檢驗(yàn)及獸殘、農(nóng)殘檢驗(yàn)項(xiàng)目等
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