Gelfree 8100蛋白質(zhì)分組系統(tǒng)

隨著生物質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展，蛋白質(zhì)和多肽分析的分辨率、靈敏度、準(zhǔn)確性、鑒定能力大為提高。尤其是Top-down蛋白質(zhì)鑒定方法大量使用后，傳統(tǒng)的一維、二維電泳或液相色譜等樣品制備技術(shù)已經(jīng)不能滿足需要。分析前如何降低樣品的復(fù)雜程度、獲得完整蛋白質(zhì)、富集低豐度蛋白質(zhì)、降低高豐度蛋白質(zhì)對低豐度蛋白質(zhì)的干擾、保留蛋白質(zhì)的各種翻譯后修飾狀態(tài)、提高樣品處理通量等，已成為蛋白質(zhì)樣品制備方法的重要前提。

美國Protein Discovery公司（現(xiàn)已被英國Expedeon公司收購）推出了一套新穎的蛋白質(zhì)分組系統(tǒng)—Gelfree 8100。該系統(tǒng)使用凝膠洗脫液相組分截留電泳技術(shù)（gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis，GELFrEE），基于蛋白質(zhì)分子量的不同，對完整蛋白質(zhì)進(jìn)行分組，使用移液器在液相中回收蛋白質(zhì)。該系統(tǒng)能在短時間內(nèi)同時處理8個樣品。在3.5kDa—500kDa范圍內(nèi)，相對于其它傳統(tǒng)分組方法，具有上樣量大、重現(xiàn)性好、分辨率高、回收率高、分離速度快和操作簡單的優(yōu)點(diǎn)。能增大蛋白質(zhì)組分析的覆蓋范圍，改善后期質(zhì)譜分析的結(jié)果，提高蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果的可信度。

Gelfree 8100蛋白質(zhì)分組系統(tǒng)由主機(jī)和8通道電泳槽兩部分構(gòu)成。主機(jī)設(shè)計(jì)緊湊，能為8個獨(dú)立的電泳通道提供電壓。使用觸摸屏，可以設(shè)置電壓、分組數(shù)和使用的通道數(shù)等參數(shù)。運(yùn)行過程中，觸摸屏實(shí)時顯示每個通道電泳狀態(tài)及電壓電流值。電泳槽由五個部分組成，分別是：陰極緩沖液槽、上樣槽、電泳凝膠管、樣品收集槽、陽極緩沖液槽。電泳凝膠管是內(nèi)裝預(yù)制SDS-PAGE膠的玻璃管。緩沖液槽與上樣槽及收集槽之間由一個截留分子量為3.5kDa的膜分隔開。

Gelfree 8100蛋白質(zhì)分組系統(tǒng)的工作原理：

樣品和樣品緩沖液混合后加入到上樣槽內(nèi)。

電泳開始后，蛋白質(zhì)首先在濃縮膠內(nèi)濃縮。

蛋白質(zhì)進(jìn)入分離膠之前被濃縮成一條窄帶。

在分離膠內(nèi)，較小的蛋白質(zhì)移動更快，更先從膠內(nèi)進(jìn)入收集槽。

到達(dá)預(yù)設(shè)的收集時間時，電泳暫停，從收集槽中收集第一組分的蛋白質(zhì)。 

繼續(xù)電泳，重復(fù)收集操作，直至完成所有組分的收集。

對于不同的蛋白質(zhì)上樣量，優(yōu)化好收集間隔時間，可以最大程度的提高蛋白質(zhì)的回收效率。

Gelfree 8100蛋白質(zhì)分組系統(tǒng)的特點(diǎn)：

  基于分子量的不同對完整蛋白質(zhì)進(jìn)行分離；

 簡化蛋白質(zhì)組成的復(fù)雜程度，縮小復(fù)雜蛋白質(zhì)樣品的動態(tài)范圍，便于使用LC-MS/MS進(jìn)行Bottom-Up蛋白質(zhì)組學(xué)研究；

 蛋白質(zhì)回收后保留其完整性，便于進(jìn)行Top-Down蛋白質(zhì)組學(xué)研究，分析翻譯后修飾、蛋白質(zhì)異構(gòu)體、氨基酸衍生物等；

 蛋白質(zhì)分離范圍高達(dá)3.5kDa—500kDa；

 8個分組通道，滿足高通量樣品處理的要求，每個通道最多可將樣品分為30個組分；

 用戶可根據(jù)需要自行設(shè)置蛋白質(zhì)分組程序，分離純化特定的目標(biāo)蛋白；

 樣品容量大，每個通道蛋白質(zhì)上樣量最高可達(dá)1mg，是普通一維電泳的5倍以上，有利于富集低豐度蛋白質(zhì)；

 樣品回收率高，>80%；

 結(jié)果高度的重現(xiàn)性，CV<15%；

 電泳過程不受蛋白質(zhì)疏水性或等電點(diǎn)的影響；

 蛋白質(zhì)樣品在液相中回收，避免了傳統(tǒng)一維、二維電泳后的染色和條帶或點(diǎn)位切割步驟；

 蛋白質(zhì)回收后在溶液內(nèi)消化，免去了費(fèi)時的膠內(nèi)消化步驟；

 特別適合為LC-MS/MS、MALDI-TOF或免疫印跡等分析方法制備樣品；

電泳槽： 

一次性電泳槽包含8個獨(dú)立通道，可同時使用1—8個通道，處理1—8個樣品，未使用的通道可保存供以后使用。