GPR-800凝膠蛋白質(zhì)回收系統(tǒng)

一維或二維電泳后的蛋白質(zhì)通常由于染色步驟而沉淀或與凝膠介質(zhì)共價(jià)交聯(lián)而固定在凝膠，所以從聚丙烯酰胺凝膠中回收高質(zhì)量、完整的蛋白質(zhì)并不容易。Top-Down蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展緩慢，很大程度上是因?yàn)闃悠非疤幚硪蠓浅?yán)格，尤其是從聚丙烯酰胺凝膠中回收高質(zhì)量的完整蛋白質(zhì)。 

借助微流控技術(shù)的發(fā)展，Protea公司開發(fā)出了GPR-800樣品回收系統(tǒng)，一種基于微流控技術(shù)，采用動(dòng)電力和水動(dòng)力相結(jié)合的辦法將蛋白質(zhì)的流動(dòng)路徑和電泳電場(chǎng)方向分離，從聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠中回收生物分子（如：蛋白質(zhì)、多肽和核酸）用于后期分析。系統(tǒng)包含主機(jī)和微流控芯片，主機(jī)GPR-800對(duì)每個(gè)通道施加500V的電壓，20分鐘內(nèi)快速的回收樣品，每個(gè)GPR芯片可以同時(shí)處理8個(gè)樣品，從而達(dá)到大通量樣品處理的能力。

特點(diǎn)：
使用專利GPR微流控芯片，高效回收低至100ng電泳上樣量的蛋白質(zhì)，芯片和液體接觸面積小，將蛋白質(zhì)表面吸附的損失降到最低，提高蛋白質(zhì)的回收率；
8通道平行處理，20分鐘內(nèi)能同時(shí)處理8個(gè)樣品，一個(gè)工作日可以處理超過100個(gè)凝膠蛋白質(zhì)位點(diǎn)；
500V高壓電洗脫，蛋白質(zhì)流動(dòng)方向和電場(chǎng)方向分離的回收技術(shù)，操作簡(jiǎn)單，回收率高，易于電洗脫后樣品的純化；
回收系統(tǒng)和配套試劑與質(zhì)譜兼容，回收后的蛋白質(zhì)可以很方便的用于質(zhì)譜分析，無需費(fèi)時(shí)的樣品純化步驟；
密閉系統(tǒng)和一次性耗材，無需擔(dān)心外來污染或樣品交叉污染；

使用GPR-800回收二維電泳分離的肌紅蛋白異構(gòu)體，完整蛋白質(zhì)分子量測(cè)定表明每個(gè)位點(diǎn)都具有不同的分子量。這種方法可以使研究者很容易的使用凝膠電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)異構(gòu)體的相對(duì)定量和分離，并從凝膠中快速高效的回收。進(jìn)而使用Top-Down質(zhì)譜技術(shù)確定每種蛋白質(zhì)異構(gòu)體的分子量和序列信息。

應(yīng)用領(lǐng)域：
使用質(zhì)譜技術(shù)，能夠?qū)⒁痪S或二維電泳的分辨力和相對(duì)定量的優(yōu)勢(shì)與Top-Down蛋白質(zhì)組學(xué)相結(jié)合；
完整蛋白分子量測(cè)量，使用質(zhì)譜技術(shù)快速的確認(rèn)一維或二維電泳凝膠中蛋白質(zhì)的分子量；
從膠內(nèi)酶切過的凝膠中回收多肽混合物，或先回收完整蛋白質(zhì)再進(jìn)行溶液內(nèi)酶切，最后用于Bottom-Up蛋白質(zhì)組分析；
使用質(zhì)譜技術(shù)對(duì)凝膠中的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行鑒定和特征描述；
確認(rèn)蛋白質(zhì)的修飾狀態(tài)，使用二維電泳的高分辨力，將蛋白質(zhì)異構(gòu)體、降解產(chǎn)物和不同修飾狀態(tài)分離開，快速回收分離開的蛋白質(zhì)用于質(zhì)譜分析；
蛋白質(zhì)的回收和保存，快速的從一維或二維電泳凝膠回收蛋白質(zhì)并保存用于后期實(shí)驗(yàn)；
生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)；
蛋白質(zhì)藥物降解產(chǎn)物分析；

GPR電洗脫緩沖液：
鑒于蛋白質(zhì)的多樣性，為了得到更好的蛋白質(zhì)回收效果，Protea公司開發(fā)了多種電洗脫緩沖液。每種緩沖液都含有酸易分解表面活性劑，在酸性條件下迅速的分解成不與樣品關(guān)聯(lián)，不具表面活性特性的成分，避免了使用SDS類電洗脫緩沖液，增強(qiáng)了樣品和質(zhì)譜分析的兼容性。使用GPR-800時(shí)，根據(jù)蛋白質(zhì)的親水性和等電點(diǎn)來選擇緩沖液，能回收到高質(zhì)量的樣品，得到最佳的回收效率，進(jìn)而得到可靠的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。